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綠色熒光蛋白標記的人血管內皮生長因子165基因重組腺病毒載體的
畢業(yè)論文
| 全部作者： | 田衛(wèi)東 白曉峰 |
| 第1作者單位： | 4川大學華西口腔醫(yī)學院口腔頜面外科 |
| 論文摘要： | 目的 構建攜帶綠色熒光蛋白的高效重組腺病毒載體AdGFP/hVEGF165。方法 應用重組腺病毒構建系統(tǒng)，以細菌內質粒間同源重組法構建復制缺陷型重組腺病毒載體。首先將VEGF165cDNA亞克隆到穿梭質粒pAdTrack-CMV上，重組穿梭質粒經(jīng)PmeⅠ酶切線性化后，轉入已含有腺病毒骨架載體的BJ5183中。同源重組后，重組的病毒質粒pAdGFP/ hVEGF165經(jīng)卡那霉素平板篩選獲得。經(jīng)酶切分析鑒定后，重組病毒質粒用PacⅠ酶切線性化，通過脂質體Lipofectamine2000轉染人胚腎293細胞。經(jīng)過包裝、擴增和純化后，測定病毒滴度。結果 重組腺病毒質粒經(jīng)PacⅠ酶切鑒定，在凝膠電泳中獲得診斷性片段，轉染的293細胞出現(xiàn)了明顯的細胞病變效應。PCR鑒定括增出測定相應的片段。重組腺病毒的滴度為：6×109pfu/m。結論 應用重組腺病毒構建系統(tǒng)，以細菌內質粒間同源重組法可成功地獲得重組腺病毒載體AdGFP/hVEGF165，重組腺病毒載體中含有GFP的標記基因可直觀檢測靶細胞轉染和外源基因的表達情況，為今后深入研究VEGF基因治療奠定實驗基礎。 |
| 關鍵詞： | 腺病毒載體，血管內皮生長因子，同源重組 遠程下載 論文(免費PDF論文全文) |
| 發(fā)表日期： | 2005年06月13日 |
| 同行評議： | （暫時沒有） |
| 綜合評價： | （暫時沒有） |
| 修改稿： |
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